- 產(chǎn)品品牌： REAGEN
- 產(chǎn)品貨號(hào)： REAGEN
- 上市時(shí)間： RNS92133
- 產(chǎn)品規(guī)格： 50/100T
- 產(chǎn)品適用： 本試劑盒適用于體外定量檢測(cè)人血清或血漿樣本中的丙型肝炎病毒核酸（HCV DNA）。
- 產(chǎn)地來(lái)源： 深圳
- 保質(zhì)期： 12個(gè)月
【產(chǎn)品名稱(chēng)】
通用名稱(chēng)：丙型肝炎病毒（HCV）核酸檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)
【包裝規(guī)格】
50人份/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒適用于體外定量檢測(cè)人血清或血漿樣本中的丙型肝炎病毒核酸（HCV DNA）。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）結(jié)合Taqman技術(shù)，對(duì)丙型肝炎病毒（HCV）的特異性DNA核酸片段進(jìn)行熒光PCR定量檢測(cè)。
【主要成分】
組分成分 | 50人份/盒 | 主要成分 | |
規(guī)格 | 數(shù)量 | ||
HCV PCR反應(yīng)液 |
884μL /管 | 1管 | 引物、探針、脫氧核糖核苷三磷酸（dNTP）、緩沖體系 |
HCV酶混合液 | 156μL /管 | 1管 | Taq酶、UDG酶 |
HCV內(nèi)參質(zhì)控品 | 250μL /管 | 1管 | 內(nèi)標(biāo)質(zhì)粒 |
臨界陽(yáng)性質(zhì)控品 | 400μL /管 | 1管 | 滅活的HCV陽(yáng)性血清 |
陰性質(zhì)控品 | 500μL /管 | 1管 | HCV陰性血清 |
HCV定量標(biāo)準(zhǔn)品1（5.0x107 IU/mL） | 250μL /管 | 1管 | 滅活的HCV陽(yáng)性血清 |
HCV定量標(biāo)準(zhǔn)品2（5.0x106 IU/mL） | 250μL /管 | 1管 | 滅活的HCV陽(yáng)性血清 |
HCV定量標(biāo)準(zhǔn)品3（5.0x105IU/mL） | 250μL /管 | 1管 | 滅活的HCV陽(yáng)性血清 |
HCV定量標(biāo)準(zhǔn)品4（5.0x104 IU/mL） | 250μL /管 | 1管 | 滅活的HCV陽(yáng)性血清 |
【儲(chǔ)存條件及有效期】
試劑置于-30~-15℃避光保存，有效期為12個(gè)月。本產(chǎn)品反復(fù)凍融應(yīng)不超過(guò)5次。
【適用儀器】
熒光定量PCR儀：ABI 7500熒光PCR儀.；ABI Quantstudio5 ；Gentier 96R；SLAN-96P全自動(dòng)醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)。
【樣本要求】
1.適用樣本類(lèi)型：人血清或血漿樣本
2.樣本保存與運(yùn)送：
上述采集的樣本可立即用于檢測(cè)，或2-8℃保存（不超過(guò)24小時(shí)），長(zhǎng)期保存請(qǐng)置于-20℃。標(biāo)本運(yùn)送用冰壺加冰或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
【檢驗(yàn)方法】
1. 樣本處理
將待測(cè)樣本、陽(yáng)性定量參考品、陰性參考品、臨界陽(yáng)性參考品進(jìn)行同步處理。取200ul樣本各加入內(nèi)參質(zhì)控品5ul,按照核酸提取試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行核酸提取。
2. 試劑配置（在準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行，與擴(kuò)增區(qū)分開(kāi)，冰上操作）
注：試劑使用前要完全解凍，使用前渦旋混勻，10000 rpm離心5 s，確保試劑完全離心至管底，否則會(huì)出現(xiàn)裝量差異的現(xiàn)象。
若有N個(gè)待檢測(cè)樣本，按下表要求進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)液的配制，配制完成后充分震蕩混勻，10000 rpm離心5 s。按每管20 μl分裝至0.2 ml PCR管中，并做好標(biāo)記，擴(kuò)增反應(yīng)液需現(xiàn)配現(xiàn)用。
N人份(μL) | |
PCR反應(yīng)液 | N×17 |
酶混合液 | N×3 |
總量 | N×20 |
3. 加樣（在樣品處理區(qū)進(jìn)行，冰上操作）
按陰性質(zhì)控品、待測(cè)樣品、臨界陽(yáng)性質(zhì)控品、強(qiáng)陽(yáng)性質(zhì)控品和陽(yáng)性定量標(biāo)準(zhǔn)品的加樣順序，分別取5μL，加入至已分裝擴(kuò)增反應(yīng)液的八聯(lián)管中，反應(yīng)總體系為25μL。蓋緊管蓋，短暫離心后置于熒光定量PCR儀中，并記錄樣本擺放順序。
4. 擴(kuò)增反應(yīng)（在擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行）
選擇FAM通道檢測(cè)丙型肝炎病毒（HCV）核酸，選擇CY5通道檢測(cè)內(nèi)標(biāo)。按以下擴(kuò)增程序表設(shè)置PCR擴(kuò)增參數(shù)。點(diǎn)擊樣本參數(shù)界面，按樣本對(duì)應(yīng)順序設(shè)置陰性質(zhì)控（NTC）、陽(yáng)性質(zhì)控以及未知樣本(UNK),陽(yáng)性定量參考品在“樣本類(lèi)型”中選擇“標(biāo)準(zhǔn)”，“標(biāo)準(zhǔn)濃度”中輸入濃度。
步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) | |
1 | 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 10min | 1 |
預(yù)變性 | 95℃ | 3min | ||
3 | 變性 | 95℃ | 10sec | 45cycle |
4 | 退火延伸及熒光檢測(cè) | 60℃ | 30 sec | |
報(bào)告熒光：FAM、CY5；淬滅熒光：NONE。 | ||||
5.質(zhì)量控制
FAM通道Ct值 | CY5通道Ct值（內(nèi)部質(zhì)控品） | |
陰性質(zhì)控品 | UNDET | ≤35 |
臨界陽(yáng)性質(zhì)控品 | ≤35 | — |
定量標(biāo)準(zhǔn)品 | ≤35 | — |
以上要求需在同一次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)滿(mǎn)足，否則，本次實(shí)驗(yàn)無(wú)效，需重新進(jìn)行
6.結(jié)果判讀
反應(yīng)結(jié)束自動(dòng)保存結(jié)果，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline 的Start 值、End 值以及Threshold 值（可以根據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整，Start 值可以在3~15、End 值可設(shè)在5~20，調(diào)整陰性對(duì)照的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線），點(diǎn)擊Analysis 自動(dòng)獲得分析結(jié)果，在Report 界面觀看結(jié)果，記錄未知樣本數(shù)值（C）。
試驗(yàn)結(jié)果判斷
6.1如果FAM通道無(wú)典型擴(kuò)增曲線或Ct值>40,CY5通道有典型擴(kuò)增曲線，Ct值<35,則判定陰性；
6.2如果FAM通道無(wú)典型擴(kuò)增曲線或Ct值>40,CY5通道無(wú)典型擴(kuò)增曲線或者Ct值>35,則需要重新采樣檢測(cè)。
6.3如果FAM通道有典型擴(kuò)增曲線或Ct值≤40，，則按以下方法判斷：
若樣本C<100,則該樣本的HCV DNA濃度<100IU/mL;
若樣本100<C<5.00E+008,則該樣本的HCV DNA濃度=C IU/mL;
若樣本C>5.00E+008,則該樣品的HCV DNA濃度>5x108IU/mL。如果需要精確定量結(jié)果，可將樣品用陰性質(zhì)控品稀釋到線性范圍后再檢測(cè)。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1．實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染，試劑污染，樣品交叉污染會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，如陰性對(duì)照檢測(cè)為陽(yáng)性，則需做進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)來(lái)確認(rèn)是哪類(lèi)污染。如為試劑污染，需開(kāi)封新的試劑盒再次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；如為樣品交叉污染，應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)；如為實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染，需對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行徹底清潔或更換實(shí)驗(yàn)室再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
2．試劑運(yùn)輸、保存或配制不當(dāng)會(huì)引起試劑檢測(cè)性能下降，出現(xiàn)假陰性結(jié)果。如陽(yáng)性對(duì)照檢測(cè)為陰性，應(yīng)開(kāi)封新的試劑盒再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
【檢測(cè)方法的局限性】
1. 該試劑盒的檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，對(duì)患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀或體征、病史、其它實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。
2. 當(dāng)樣本的病毒含量低于最低檢出限時(shí)，可能會(huì)出現(xiàn)假陰性。陰性結(jié)果僅說(shuō)明提取的核酸濃度低于該試劑盒的檢測(cè)極限，但不能完全排除病毒感染的可能。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1.準(zhǔn)確性：企業(yè)陽(yáng)性參考品檢測(cè)結(jié)果全部為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為15/15。
2.最低檢測(cè)限：該試劑盒最低檢測(cè)限為50IU/mL。
3.對(duì)不同基因型的覆蓋：本試劑盒對(duì)常見(jiàn)的HCV6個(gè)基因型樣本，均可在最低檢出限濃度檢出為陽(yáng)性。
4.臨床特異性：對(duì)10份臨床HCV DNA陰性樣本進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果均為陰性。
5.經(jīng)驗(yàn)證與下列病原體無(wú)交叉反應(yīng)：甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、腺病毒、人乳頭瘤病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、水痘帶狀皰疹病毒、人類(lèi)免疫缺陷病毒、戊型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、EB病毒、人巨細(xì)胞病毒、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌。
【注意事項(xiàng)】
1．請(qǐng)嚴(yán)格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求在冰上操作。
2．試劑配制建議在試劑配制區(qū)進(jìn)行，樣品處理要求在生物安全柜內(nèi)操作。臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。
3．反應(yīng)液中的成分對(duì)光敏感，應(yīng)避光保存。反復(fù)凍融可能降低試劑盒靈敏度，請(qǐng)按檢測(cè)頻次將反應(yīng)液以適當(dāng)體積分管保存。
4．反應(yīng)結(jié)束后，擴(kuò)增管請(qǐng)置于密封袋內(nèi)丟棄，當(dāng)日清理，切忌開(kāi)蓋。
5．不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿混合使用，請(qǐng)?jiān)谟行趦?nèi)使用試劑盒。
6. 本品僅用于體外診斷。